成都永腾·粒子计数器、pm2.5检测仪、PM2.5传感器泵吸式;自主研发技术 · 扎根行业多年

关于我们|联系我们|加入收藏

全国热线: 02884779619
13981787165
当前位置:主页 > 资讯中心 > 行业新闻 >

成品预装培养基平皿实用技术手册(连载一)

文章出处:永腾电子刊责任编辑:空空作者:空空人气: 发表时间:2019-07-10 21:27 字体大小:【

  微生物污染是药品质量评估的重要指标,为避免外源性污染进入药品生产车间,2010版GMP规定:制药企业需对洁净环境进行动态或静态监测,使用沉降菌平皿、空气浮游菌平皿和表面接触皿评估无菌生产的微生物状况。

  过去制药企业一般通过自配培养平皿满足其使用需求,但由于自配培养平皿存在一些难以克服的问题,如:

  制备无菌平皿培养基需具备配皿、包装、抽真空、伽马射线终端灭菌等条件,工艺复杂,难以实现,如不进行终端灭菌易造成假阳性结果;

  经100%的预培养后,需要对平皿培养基进行无菌性检查,以防带入外来的污染物到监测区;

尘埃粒子洁净室

  使用容器装放平皿,或直接将平皿传入洁净区使用,也会污染生产区;

  自配的平皿有效期短,常小量多次配制,增加了批间差异和管理成本。

  因而,制药企业越来越多的选择使用标准化的商品预灌装培养平皿。随着新版GMP的深入落实,自配平皿将逐渐被预灌装培养平皿取代。

  为了加强对洁净区环境监测监督管理,国家食品药品监督局于2008年9月27日下发《关于培养基类产品分类界定的通知》,将培养基类产品列入医疗器械管理,并要求监管部门及生产经营单位遵照执行。培养基类产品分类界定具体内容:即基础培养基、营养培养基、通用增菌培养基、运送培养基、保存培养基等作为Ⅰ类医疗器械管理的培养基产品;而药敏试验用培养基、鉴别培养基、专用/选择增菌培养基、分离培养基、选择培养基作为Ⅱ类医疗器械管理的培养基产品。

  2013年11月26日,国家食品药品监督总局在《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》中将培养基类产品划分在《6840 体外诊断试剂分类子目录(2013版)》。

  2014年9月5日,国家食品药品监督总局在《关于医疗器械生产质量管理规范执行有关事宜的通告》中第四点指出“自2018年1月1日起,所有医疗器械生产企业应当符合医疗器械生产质量管理规范的要求”。从法规上对培养基类生产作出明确规定。

  为帮助广大用户了解和使用商品预灌装培养平皿,我们编写了这本《成品预装培养基平皿实用技术手册》,手册以实践为基础,结合洁净区微生物控制理论,详细的阐明了如何有效控制洁净区微生物才能达到洁净区微生物的稳定、可控制水平,以及洁净环境微生物检测方法及其发展史,阐述在洁净区微生物检测过程中用到的预装成品培养基平皿的生产管理以及质量控制,预装成品培养基平皿的质量要求,该产品是如何使用,在使用过程中常见问题和解答等内容。

  本手册共分8章,引入洁净区微生物监测过程的实际案例,也给出如何监测洁净区环境的基本思路,对国外的一些先进理念进行详细的探讨,希望能够帮助大家在使用成品培养基平皿过程得到有效的帮助,使监测结果反映洁净区微生物的真实水平。手册在不同章节中可能出现一些重复的内容,但是这种重复内容是非常有必要的,主要是为了强调其重要性。

  本手册除了适用于制药行业外,也适用于医院、疾控中心、食品、以及化妆品、微电子等行业的环境微生物检测。

  由于药品、特别是生物制品行业标准一直处于更新状态,加之编者水平有限,时间仓促,手册难免存在不足之处,我们诚心希望各位读者及同行批评指正。

  第1章 洁净区微生物控制规范及要求

  一、洁净区微生物的控制

  1、药品质量除直接反映在药效和安全性外,还表现在药品质量的稳定性和一致性上,药品生产过程中如果不对生产环境进行严格控制,很容易受到微生物、尘埃粒子等污染或交叉污染。药品的这些特性,对药品生产过程所处的室内环境,对空气的温度、湿度、洁净度、压差、排放方式以及人员卫生的保持等各个方面提出了各种要求。为了确保药品的质量符合要求,制药企业中药品生产环境需要在洁净区内进行加工完成,洁净区是指将一定空间范围内的空气中的尘埃粒子、微生物等污染物排除,并将室内的温湿度、洁净度、压差、排放方式、振动噪音、照度及静电控制在一定范围内,而给予特别设计的房间。即通过采暖通风和空气调节系统(heating ventilation and air conditioning, HVAC系统)来控制,在中国GMP中称空调净化系统,是制药企业的一个关键系统,它对制药企业能否实现其像患者提供安全有效的药品的目标具有及其重要的影响。如果药品生产环境得到合理的设计、建造、调试、运行和维护保养,则有助于确保产品的质量、提高产品的可靠性,同时降低企业初期的投资成本和后期运行成本。

  2、GMP(2010版)洁净区分类

  空气洁净度指洁净环境中空气包含悬浮粒子量的程度,空气中含粒子的数量越少,洁净度越高,世界各国均有相应的洁净度标准,我国的GMP(2010版)规定洁净区的设计必须符合相应的洁净度要求,包括达到“静态”和“动态”的标准。

  无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4个级别:

  A级:高风险操作区,如灌装区、放置胶塞桶和与无菌制剂直接接触的敞口包装容器的区域及无菌装配或连接操作的区域,应当用单向流操作台(罩)维持该区的环境状态。单向流系统在其工作区域必须均匀送风,风速为0.36-0.54m/s(指导值)。应当有数据证明单向流的状态并经过验证。

  在密闭的隔离操作器或手套箱内,可使用较低的风速。

  B级:指无菌配制和灌装等高风险操作A级洁净区所处的背景区域。

  C级和D级:指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区。

  以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表:

  洁净度级别悬浮粒子最大允许数/立方米

  静态动态(3)

  ≥0.5μm≥5.0μm(2)≥0.5μm≥5.0μm

  A级(1)352020352020

  B级3520293520002900

  C级3520002900352000029000

  D级352000029000不作规定不作规定

  注:

  (1)为确认A级洁净区的级别,每个采样点的采样量不得少于1立方米。A级洁净区空气悬浮粒子的级别为ISO 4.8,以≥5.0μm的悬浮粒子为限度标准。B级洁净区(静态)的空气悬浮粒子的级别为ISO 5,同时包括表中两种粒径的悬浮粒子。对于C级洁净区(静态和动态)而言,空气悬浮粒子的级别分别为ISO 7和ISO 8。对于D级洁净区(静态)空气悬浮粒子的级别为ISO 8。测试方法可参照ISO14644-1。

  (2)在确认级别时,应当使用采样管较短的便携式尘埃粒子计数器,避免≥5.0μm悬浮粒子在远程采样系统的长采样管中沉降。在单向流系统中,应当采用等动力学的取样头。

  (3)动态测试可在常规操作、培养基模拟灌装过程中进行,证明达到动态的洁净度级别,但培养基模拟灌装试验要求在“最差状况”下进行动态测试。

  3、洁净区各级别对微生物的要求

  应当对微生物进行动态监测,评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法(如棉签擦拭法和接触碟法)等。动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。

  对表面和操作人员的监测,应当在关键操作完成后进行。在正常的生产操作监测外,可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。

  洁净区微生物监测的动态标准(1)如下:

  洁净度级别浮游菌

  cfu/m3沉降菌(f90mm)

  cfu /4小时(2)表面微生物

  接触(f55mm)

  cfu /碟5指手套

  cfu /手套

  A级<1<1<1<1

  B级10555

  C级1005025-

  D级20010050-

  注:

  (1)表中各数值均为平均值。

  (2)单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时,同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。

  4、洁净区按状态分类

  动态指生产设备按预定的工艺模式运行并有规定数量的操作人员在现场操作的状态。

  静态指所有生产设备均已安装就绪,但没有生产活动且无操作人员在场的状态。

  5、洁净区按气流流型分类

  洁净区内的气流组织是为了在生产洁净区达到特定的空气洁净级别,以限制和避免尘埃粒子及附着在尘埃粒子上的细菌对产品、直接接触产品的包装材料、设备、容器、用具的污染而采用的净化空气流动状态和分布状态。

  室内空气组织形式按气流流动状态有层流和乱流,层流又分垂直单向流(层流)和水平单向流(层流)。

  单向流指空气朝着同一个方向,以稳定均匀的方式和足够的速率流动。单向流能持续清除关键操作区域的颗粒,如下图:

  

 

  垂直单向流洁净区:垂直单向流以合适的气流速度全方位控制污染。空气流动的速度越快,洁净效果越好。通常,单向流洁净室设计中,A级垂直单向流内断面风俗v≥0.36m/s。

  日常生产中最常见的垂直单向流装置为A级层流罩,规格较小,主要用于保护产品生产高风险区域,如无菌灌装的内包材开口区域、灭菌后器物的保存等。

  水平单向流洁净区:水平单向流洁净区在侧面送风墙面布满高效过滤器,对面的回风墙上满布着中效过滤器(或与回风格栏组合)。气流通过高效空气过滤器达到洁净状态,并经水平方向以水平单向流状态匀速流过工作区域,带走工作区域散发的尘埃粒子、余热、余湿,经回风进入回风静压箱。日常生产中最常见的水平单向流装置为水平净化工作台,规格较小。

  水平单向流洁净室必须考虑克服尘埃粒子的重力沉降的影响,因此,设计中A级水平单向流洁净室内断面风俗应稍大于垂直单向流洁净室的风速。

  乱流洁净区

  乱流洁净室的洁净空气通过送风口经过高效过滤器出口的扩散罩进入室内,洁净空气迅速向四周扩散,与室内空气混合,稀释室内污染的空气,并与室内热负荷进行交换,混合后的气流带着室内的尘埃里, 在空气正压的作用下,从回风口排走,如下图:

  

 

  乱流洁净室的气流组织主要包含4种:

  (1)孔板顶送风,又分全孔板顶送风与局部孔板顶送风。

  (2)流线型散流器顶送风,此种气流组织方式适用于4米以上的高大厂房。

  (3)高效过滤器风口扩散顶送风,是生产用洁净区常用的气流组织形式。

  (4)侧送风。此种形式适用于层高较低的厂房,多用于旧厂房改造。侧送风室内涡流多,洁净度只能达到C级。

  6、洁净区内送风量和换气次数

  如前所述,区别乱流洁净区或单向流洁净区的关键指标是空气在洁净区内的流动状态,而空气的流动状态是又空气的流动方式和速度决定的,因此,指定大小的空间内单位时间洁净空气量对洁净度起决定性作用。下表显示洁净室内操作人员数量、空气换气次数与室内洁净度的关系。

  洁净室内操作人员数量、空气换气次数与室内洁净度的关系:

  操作人员数量(人/㎡)空气洁净度

  1000级10000级100000级

  0.00215~2710~2510~22

  0.00423~3310~2510~22

  0.0160~6010~2510~22

  0.02130~13013~2710~22

  0.04250~25062~6210~22

  0.1——62~6212~27

  0.2——130~13015~28

  注:

  室内换气次数的下限为30min,洁净度需达到80%。

  单向流(层流)洁净区送风量=洁净区断面积(㎡)X风速;

  乱流(非单向流)洁净区送风量=洁净区容积(m3)X换气次数(次/h)。

  药品生产洁净区环境的换气次数应针对不同剂型,参考换气次数的规定根据热量平衡与风量平衡计算加以验证确定。

  7、洁净区微生物污染的来源

  微生物污染是指微生物产生,附着而给特定的环境带来不良影响。如果细菌得到必要的养料,一定量的水分和合适的温湿度,它们就能迅速繁殖,其繁殖速度非常快,从而给进行生产的洁净区带来危害。洁净区污染可以分为两种污染,第一是无机物(没有生命的)的污染,如空气中的悬浮粒子,材料上的微粒;第二种就是有机污染,如微生物。微生物污染的来源主要有五个方面:人员、设备、物料、空气和水。

  (1) 人员的污染

  众所周知,人员是洁净区污染的主要来源,并且人对洁净区的污染是一个永不休止的过程。皮肤屑,头发,人体内的微生物等。

  细菌 /每分钟

  打喷嚏 12 - 3400

  咳嗽 1 - 1000

  唱歌 1 - 128

  讲话 1 - 28

  平静呼吸 0 - 4

  以洁净区操作人员为例:

  (1)坐着或站立不动时,每分钟传播的微粒数高达十万 (10,0000/min).

  (2) 坐着进行适度的躯体和手臂运动时,微粒数高达五十万(50,0000/min).

  (3)正常步行时微粒数高达二百五十万 (250,0000/min)

  (4)快速行走时微粒数高达一千万(1000,0000/min)

  (5)从事安装、维修工作时微粒数高达三千万(3000,0000/min)

  人体中栖息着1000亿个以上的微生物,其种类多达400种,分布在身体各部分。

  口腔:

  1 毫升唾液里有1亿个以上的细菌,主要有大肠杆菌、脆弱类杆菌、厌氧

  性球菌、乳酸杆菌,口腔中的病菌清除后可在6小时内又形成。

  皮肤:

  皮肤表面每四天换新一次,每天脱落 4 - 6 克的皮肤屑, 每个皮肤屑由大约4 个细菌,

  主要有表皮葡萄球菌, 金黄葡萄球菌。

  那该如何控制人员的污染的呢?

  首先,对人员进行GMP培训,从事制剂配制操作及药检人员,应经专业技术培训,具有基础理论知识和实际操作技能。凡有特殊要求的制剂配制操作和药检人员还应经相应的专业技术培训。凡从事制剂配制工作的所有人员均应熟悉GMP规范。

  其次,洁净室(区)出入限于在该室的工作人员和经批准的人员,进入洁净室(区)的人员不得化妆和佩带饰物,不得裸手直接接触药品。进入洁净区的人员应有健康档案,并每年至少体检一次。传染病、皮肤病患者和体表有伤口者不得从事产品生产相关工作。

  第三,洁净室人员定期培训微生物基础理论和相关的污染来源,穿戴无菌服装的正确方式,

  无菌操作,例如: 操作时活动进行的速度,操作范围和室内气流流向,无菌材料或物品接触,采样消毒方式。还应包括洁净室操作安全,洁净室清洁和维护,注意个人的清洁卫生。

  (2) 设施、设备的污染

  设施设备很少是微生物固有的来源。但是设计缺陷、结构材料不良以及不正确的操作也会对污染水平造成明显的影响,设备和其他来源一起构成污染来源。

  新设备可以设计把内部微生物污染来源控制在最低水平,从而达到卫生级别。反之这些设备的微生物控制是非常难以解决的。

  除了设备的设计会带来微生物污染之外,解释设备的清洁,在药品生产的每道工序完成后,对制药设备进行清洗是防止药品污染和交叉污染的必要手段。产品生产后,总会残留若干原辅料和微生物。微生物在适当的温湿度下以残留物中的有机物为营养可大量繁殖,产生各种代谢产物,从而大大增加残留物的复杂性和危害程度。如果这些残留的原辅料、微生物和其代谢产物进入下批生产过程,必然对下批产品产生不良影响。因此,必须通过清洁将这些污染源从药品生产的循环中除去。

  工艺设备的清洁方式,通常可分为手工清洁方式和自动清洁方式。手工清洁方式的特征是主要有人工持清洁工具,按预定的要求清洗设备,根据目测确定清洁的程度,直至清洁完成。自动清洁方式的特点是由自动化的专门设备按一定的程序自动完成整个清洁过程的方式。

  不管采用何种清洁方式,关键是将工艺设备的难清洗点清洁干净,例如:配料罐的清洁,搅拌桨的浆叶底部表面是最难清洁的点,在清洗验证时是要考虑清洗用水的流速,温度、清洗时间等等因素,最后根据验证结果的参数修订清洗的SOP。

  

 

  (3) 物料的污染

  物料是污染源也是我们应该重视的污染源之一,物料是产品构成的基础部分,特别是直接接触产品的原辅料、内包材等。所以在产品关键工序中,我们要控制物料的微生物水平,以避免由于物料的污染导致洁净区被污染,最终影响到产品的质量。

  所以进入洁净区的物料,对微生物负载限制的关键区域都是潜在的微生物污染源。微生物都可以依附在未经处理的物料上,很难对这些微生物做一个普通的风险评估,所以对物料的供应商审计,按物料来源进行分区管理,建立物料的微生物监测程序等等都是目前常用控制物料污染的方法。

  但是更需要我们重视物料在仓储、转移过程中再次污染,进洁净区的物料必须经过净化、外表消毒处理,进入洁净区之前按照企业内部的SOP进行净化的房间,物料净化、消毒、转移的路线应与人员进入的路线分开,避免交叉污染。主要是物料转移过程所用的传送设备滋生的“粘尘带菌”以及传输过程中带动空气流动所造成的空气污染。

  如果用电梯运输所用物料,应做到人、物不能共梯。电梯应设在非洁净区,如果设在洁净区,电梯口应该设置缓冲区。

  (4) 空气的污染

  空气是洁净区污染源的携带者,自然的空气都是被微生物污染的,微生物通过依附在空气中的非活性粒子上,如尘埃粒子、水滴、皮肤屑等等,侵袭产品,导致污染。

  制药企业生产中主要控制微生物污染的方式是使用洁净室,对于更关键的工序,还采用隔离技术。洁净区中的行为也必须按照规范有效的进行。同时还要对洁净区的其他影响因素进行限制,如人员、物料和水。

  洁净区的空气是通过净化空调系统对空气的处理,确保洁净区内空气符合要求。所以预防控制空气污染源应该德宝空气的过滤,与非洁净区保持正压以及各级别之间应该有气锁保护,保证空气由洁净级别较高的房间向较低的房间流动。

  (5)水的污染

  从理论上来讲,微生物在纯水中是不能生长的。但是,所有的各类水,不管怎样仔细地蒸溜或过滤,总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。

  在生产过程中,水是应用最广泛的原料之一。这就是为什么我们药厂的卫生规程不仅必须仔细地控制用于生产过程的水,而且要控制好如何正确地用水来清洗我们的设备。

  对于来源于水污染的控制手段,严格按照法规要求,无菌灌装区域使用的水必须经过无菌过滤,在低级别的服务于无菌药品生产区的辅助洁净区,应该用制药级别的工艺用水,如纯化水活注射用水。

  另外一个非常重要的控制措施就是及时清除洁净区内地面积水,清除完成后立即用消毒剂进行积水区域进行消毒,尽可能减少微生物滋生的风险。

  总之,确保洁净区微生物得到良好的控制,要把握三大原则:第一,预防外来污染物的进入;第二,连续地消除产生的污染;第三,限制污染的产生。控制活性尘埃、非活性尘埃的污染。

排行榜

同类文章排行

主打设备

最新资讯文章

您的浏览历史